半薄切片是进行超薄切片前的必要环节,有助于准确定位。常用的染色方法有甲苯胺蓝、吉姆萨染色法等。这些染色单一,仅能提供组织细胞着色深浅不同的蓝色,对特殊组织与特殊结构则不能选择性的染色。若经Ｈ Ｅ染色则可提供更为详细的结构,弥补石腊切片的不足,且结构介于光镜和电镜之间,可应用到临床中,提高病理诊断水平。为此,我们在实验工作中摸索出改进的苏木素、伊红(Ｈ Ｅ)染色法用于半薄切片,清晰地显示组织结构,提高切片分辨率。
现介绍如下:
1　材料和方法1 .1　
样品的制备:取大鼠肾、胰、大脑皮质等组织,常规电镜包埋。切片机切取1μｍ厚的半薄切片,在洁净的载玻片上加一滴蒸馏水,用眉笔将切片移至水滴上。置于电热板上加热烤干,使切片牢固地贴于载玻片上。
1 .2　染液:
Ｌｉｅ苏木精;1%伊红(用95%乙醇配制ｐＨ4)
1 .3　染色方法
1. 3. 1　常规染色法:
①切片上加45滴苏木精染液,放在60℃温箱中加热1 5ｈ(置于湿盒内以防染液蒸发)。
②自来水冲洗后再用蒸馏水洗(不要直接冲到切片上),温箱烤干或自然干燥。
③切片上加45滴1%伊红染液,置于60℃温箱中加热5ｍｉｎ。
④步骤同②。
⑤中性树脂胶封片。
2　结果与讨论
半薄切片Ｈ Ｅ染色后组织结构清楚,细胞核呈蓝色,核仁、核膜清晰可见,细胞浆、间质呈红色。在实验中我们对Ｈ Ｅ染的方法分别进行了比较,既可以用两种染液常规方法染色,既快速又简便,也可将两种染液按比例混合染色。混合染色法只需一步即可完成染色,即简便又快速,混合比例以2∶1的效果好。但细胞核略微发红,易产生误差,均不如常规Ｈ Ｅ效果好。但常规后Ｈ Ｅ染色苏木素时间为1 5ｈ,此时细胞核着色深浅适度不需分化。Ｈ Ｅ染色用于半薄切片曾经有人在未公开的文献上报道过,但步骤较麻烦,要用过碘酸、过氧化氢、氢氧化钾无水乙醇饱和溶液进行脱树脂处理后再染色。而我们的实验,简化了脱树脂步骤,染色并未受影响,同样取得了满意的效果。而且载玻片上无须涂抹蛋白甘油等防脱片剂,避免了切片污染。一般经苏木素—伊红染色的标本在保存良好的情况下可达数十年不退色,有利于标本的保存及回顾性研究。